二、游离钙的测定

测定细胞内游离钙的方法很多，如Ca2 ＋激活发光蛋白法、金属铬指示剂法、Ca2 ＋选择性微电极测定法等。利用Ca2 ＋指示剂来观察细胞内游离Ca2 ＋已成为一种主要手段。第一代荧光指示剂为Quin‐2，因其激发光波长太短，易激发自身荧光，并可能对细胞的生理功能有一定影响。无法反映细胞内高浓度的Ca2 ＋变化。Fura‐2为第二代荧光指示剂，选择性和敏感性较Quin‐2好，与Ca2 ＋结合后荧光强度强，可以用双波长（340nm、380nm）激发，可用荧光比率来反映荧光强度的变化。消除方法是测定前冲洗细胞或缩短测定时间以及在室温下操作。加入EDTA20μl(钙螯合剂),孵育1～10min，激发波长488nm测定荧光，即Fmin值。